I型HLA基因中和癌症相关的体细胞突变 Comprehensive analysis of cancer-associated somatic mutations in class I HLA genes

Comprehensive analysis of cancer-associated somatic mutations in class I HLA genes

肿 瘤的发生与免疫系统的功能密切相关。在免疫系统中,MHC (主要组织相容性复合体, major histocompatibility complex) 是所有生物相容复合体抗原的一种统称。HLA (human leucocyteantigen) 就是人类的MHC基因,即人类白细胞抗原,位于6号染色体,它所在的区域是人类基因组中多态性最高的区域之一,有高达上千个等位基因。

HLA –I 类基因在细胞毒性T细胞反应中作用至关重要,可以在细胞表面呈递可被T细胞受体识别的肽段。

研究表明,肿瘤中HLA基因存在大量的体细胞突变。这强烈地暗示了HLA突变导致的功能丧失与肿瘤细胞的免疫逃避密切相关。因此,分析肿瘤病人的HLA基因序列的变化就显得异常重要。

然而,在人的参照性基因组数据库中每个HLA基因只给出单一的参考序列。由于HLA等位基因的高度多态性,基因序列的比对往往得不到理想的结果。加之HLA基因的GC含量较高,这会增加测序的困难。这为序列比对及突变等进一步的分析带来了极大的挑战。

为 了克服上述的问题,Sachet A Shukla等发表在《Nature Biotechnology》上的文章对HLA –I 类基因中和癌症相关的体细胞突变进行了全局性的分析。在这篇文章中研究者开发了一种称为Polysolver ( polymorphic loci resolver, 多态性位点解析器)的计算流程,能够精确计算出I类HLA-A,B,C 的种系等位基因。以种系等位基因作为参考,可以分析肿瘤病人样本中HLA基因体细胞突变情况,从而能够非常精确地对病人肿瘤样本HLA进行分型。

文 中对20多种肿瘤的7930对(肿瘤和正常组织)样本进行WES(whole-exomesequencing,全外显子组测序)数据分析,从其中266 个肿瘤患者中发现了298个HLA基因的非沉默突变(nonsilent mutations)。这298个突变中大多数为功能性突变,包括可能的功能缺失(Loss-of-function)突变。

通过这一研究,研究者提出以下几点生物学意义:
第 一,结肠腺癌(colon adenocarcinoma)、头颈癌(head and neck cancer)、肺鳞状细胞癌(lung squamous cancer)和胃癌(stomach cancer)受HLA –I 基因突变显著影响,而胶质瘤(glioblastoma)、卵巢癌(ovarian cancer)、慢性淋巴细胞癌(CLL)则较少包含HLA基因突变。

第二,HLA基因一些非同义突变影响了抗原的呈递。比如研 究者鉴定出至少在3例肿瘤样本中发生非同义突变包括29个热点,至少在2例肿瘤样本中发生非同义突变包括35个热点,这提示这些突变热点是可以被正向选择 的。导致功能丧失的突变事件数量也较为显著,如移码突变、无义突变、剪切位点的突变等;这些功能丧失的突变事件极有可能影响了HLA –I 类基因编码产物在细胞表面的表达,从而影响了抗原的呈递。

第三,HLA突变肿瘤中浸润的效应淋巴细胞会上调一系列和细胞裂解活性相关的基因,但这和肿瘤细胞的免疫逃避之间的关系需要进一步实验阐明。
Figure 1. Polysolver 算法的开发与验证;a, Polysolver算法示意图。b,  Polysolver算法和已报道算法的比较。其衡量标准有(i) sensitivity,所有已有等位基因被鉴定出来的比例;(ii) precision,参考等位基因正确的概率;(iii) accuracy,所有等位基因被召集出来的比例;(iv) homozygosity success rate, 纯合基因被鉴定出来的比例。

Figure 2. 在 多种癌症样本中检测I型MHC基因的体细胞突变。a,利用Polysolver检测HLA基因体细胞突变示意图。突变检测算法MuTect和 Strelka分别用来检测点突变和indels。b,比较TCGA鉴定的(黄色)与Polysolver鉴定的(黑色)不同肿瘤中HLA突变 (n=2545)。绿色:两种方法共同鉴定出的突变。c,用TCGA和Polysolver鉴定的HLA突变数量以及每种癌症所占百分比的比较。d,用 RNA-seq和long-read sequencing验证突变。基于RNA-seq的验证方法只用49个包含HLA点突变的样本(错义突变,无义突变,非终止突变,剪接位点突变)。 Long-read sequencing方法用来验证18个有DNA样本的HLA等位基因。

Figure 3. HLA突变在不同的癌症样本以及HLA的功能性结构域的分布情况。上图:功能丧失突变的分布情况,包括移码突变和无义突变事件。柱状图示意了每个位点的突 变次数。中间图:不同肿瘤样本HLA的突变分布模式。下图:突变次数≥5突变事件分布模式。膀胱(BLCA), 乳腺(BRCA), 宫颈鳞状细胞 (CESC), 结肠腺癌 (COAD), 头颈鳞状细胞(HNSC), 低级别胶质瘤(LGG), 肺腺癌(LUAD), 肺鳞状细胞(LUSC), 前列腺腺癌(PRAD), 直肠腺癌(READ), 黑色素瘤 (SKCM), 胃腺癌(STAD), 甲状腺 (THCA), 子宫内膜(UCEC)。

Figure 4.MHC I型突变的分布以及功能性选择的证据。a,HLA基因与非HLA基因突变图谱的比较。b,HLA基因突变在外显子上的分布.c, HLA中和(呈递的抗原)肽段直接接触位点的突变。左边:9个氨基酸的肽段和HLA以及TCR复合体的相对位置示意图;右边:肽段的9个氨基酸和HLA相 对位点接触的情形分布。(绿色,HLA锚定位点;蓝色,T细胞分子接触位点;)直方图代表对应位点的突变频率。d,MHC I型突变的肿瘤中(浸润的)杀伤性淋巴细胞的效应基因表达被上调。热图显示的是HLA突变组和非突变组肿瘤样本的中基因表达变化的比较。

战胜癌症成真:免疫细胞治疗挣脱死神束缚

8岁的埃米莉-怀特海德(Emily Whitehead)5岁就被诊断出患上急性淋巴细胞白血病(ALL)这种可怕的癌症,第一轮化疗时便受感染,双腿几乎不保,经治疗后病情有所缓解,计划 骨髓移植。然而等待骨髓移植期间白细胞又一次复发,这次再也无计可施的她6岁时接受了CAR T(T细胞嵌合抗原受体)免疫细胞治疗,她是第一位接受CAR细胞治疗的儿童患者。

急性淋巴细胞白血病(ALL)这种可怕癌症的埃米莉-怀特海德

埃米莉-怀特海德治疗前后的对比

小 埃米莉接受的是一种除了大胆的实验性治疗外还从未对一个孩子进行的试验性疗法:抽取小埃米莉的血液,在其中提取她的白细胞,利用改良的艾滋病毒对这些白细 胞进行改造,教会它们识别肿瘤细胞并进行杀伤。改造后的白细胞又重新输回小姑娘的体内。经历了噩梦般的连续高烧后,小埃米莉挣脱了死神的束缚重新醒了过 来。

接受这种疗法之后的两年埃米莉身体健康,可以跟家里的小狗滚作一团,可以上学,可以学钢琴,她的头发也长出来了扎成马尾辫,可以像其他 孩子一样体验生命的美好,医生和科学家们的疯狂试验成功了。CAR T的出现使人们在对抗癌症这一隐性又无处不在的恶魔的战争中,找到了扭转战局的契机。

在2015年的深圳国际BT领袖峰会上,美国宾夕法尼亚州大学终身教授、美国科学院院士卡尔?朱恩教授在会上发表了主题演讲:决胜癌症,向人们介绍CAR T这种神奇的疗法。

美国宾夕法尼亚州大学终身教授、美国科学院院士卡尔·朱恩教授

卡尔?朱恩教授是CAR T技术的发明者,迄今已发表超过360篇SCI论文,申请专利46项,授权31项,2014年,FierceBiotech将他评为“全球生物制药界最有影响力的科学家”。

埃米莉战胜癌症并非个例,卡尔?朱恩教授介绍说,接受CAR-T疗法的还有一个美籍华人小男孩,“我上次见到他,我问他癌症怎么样,他说他全身的肌肉很痛,在得到治疗之后,他说他已经想要并且认为自己可以成为一名棒球手。”

2014 年12月,在美国血液学学会(ASH)的会议上,Juno Therapeutics公司的科学家报告了在进行当中的嵌合抗原受体(CAR)T细胞疗法“JCAR015”1期治疗的情况。在治疗中,27位急性淋巴 性白血病(ALL)成年患者中有24位的病情有所缓解,其中6人在超过一年时间里都没有受到该疾病的困扰。急性淋巴性白血病是一种非常难以治疗的疾病,而 且病情发展迅速,大部分患者会在几个月内死去。

Juno Therapeutics公司的创始人之一米歇尔?萨德兰(Michel Sadelain)说:“对于那些已经无法对其他治疗方法做出反应的患者来说,这样的疗效是出乎意料的。”

这 家位于西雅图的公司创办于2013年,目前已经拥有4种正在试验中的靶向CD19分子的CAR-T细胞治疗技术。这些疗法的原理很简单:提取病人血液中的 T细胞,通过基因修饰,使这些细胞能够识别并杀死肿瘤细胞;这种修饰是利用病毒载体将一种人工的,或嵌合的特异性癌症相关抗原——在这个例子中是与B细胞 有关的血液细胞表面表达的CD19抗原——注入到T细胞中,再把这些T细胞输入患者体内。修饰后的T细胞能够识别并杀死肿瘤细胞,同时使免疫系统中的其他 参与者重新开始活动。“CAR疗法同时也是细胞疗法、基因疗法和免疫疗法,”萨德兰说,“它在根本原理上与目前所有的药物疗法都不一样。”在急性淋巴性白 血病、非何杰金氏淋巴瘤和慢性淋巴细胞白血病(CLL)的治疗试验中,Juno公司的CD19-CAR-T细胞技术都获得了预期的效果。

在 美国血液学学会的会议之后几星期,Juno公司的股票上市,市值达到2.646亿美元,是2014年最大的生物技术IPO。在一个月时间里,该公司的市值 从20亿美元猛涨到47亿美元,成为十年来最大的生物技术公司之一。到2016年底,Juno公司计划能有10种针对6种疾病的药物进行试验并上市,同时 利用CAR-T细胞技术打造一个全新的生产基地。

Juno公司并不孤单。CAR T最开始只有一系列非常有限的学院机构,现在已经成为备受关注的新领域正在发展,学术机构、研究机构,无论是来自美国和中国,都正在积极的参与。从 2013年末期到2014年,再到现在,这个新领域中发生的一切,包括科学研究、公司合作以及资金注入等活动一直没有停歇。到目前为止,大多数主要的制药 公司都进入了CAR-T细胞技术的竞技场。

过去两年中,至少有6家公司签下了价值数亿美元的合同,随着未来各种产品的开发脚步,预计还会有 更多的资金流入。目前已经有数十项相关的临床试验正在进行。有关CAR-T的抗原受体细胞在全世界有77个大大小小的临床实验正在进行,它覆盖很多不同的 地方,最多的是美国有48个临床实验,中国第二位,有20个相关的临床试验,还有八个在欧洲地区,中国在不断开发、制定标准,欧洲也在努力的赶上。

过 对T淋巴细胞进行修饰,使嵌合抗原受体(chimeric antigen receptors,CARs)得到表达,科学家能够使细胞识别并杀死那些逃过免疫系统的肿瘤细胞。嵌合抗原受体能够识别癌症特异性的抗原。这一过程涉及 到提取病人的T细胞,将一个嵌合抗原受体的基因转入,然后把转入后的细胞注入到病人体内

漫长的研发

CAR- T细胞疗法并不是一夜之间就出现的,而是经历了长期的研究和开发。20世纪80年代晚期,以色列魏茨曼科学研究学院的化学家兼免疫学家齐利格?伊萨哈 (Zelig Eshhar)开发了第一种CAR-T细胞。1990年,伊萨哈休了一个年假,来到美国国立卫生研究院(NIH),与斯蒂芬?罗森伯格(Steven Rosenberg)合作研究靶向人体黑素瘤的嵌合抗原受体。伊萨哈说:“我们设计CAR-T细胞是为了克服T细胞攻击肿瘤细胞时遇到的一系列问题。”这 些问题包括肿瘤细胞能使组织相容性复合分子静默,从而避开免疫系统的识别,以及逐渐免疫抑制的肿瘤微环境。

伊萨哈和罗森伯格一种模块设计的 方式构建了CAR-T细胞,包括一种细胞外的特异性靶向癌细胞的抗体,后来增加了一种能加强CAR-T细胞活动的胞内共刺激信号域,使T细胞能更快地增殖 并杀死癌细胞。基于这项工作,学术界和制药业的研究者开始针对模块设计中的每一个部分进行了开发和改进。生物制药公司Kite Pharma的首席执行官Arie Belldegrun说:“最终我们需要20年时间,去学会让这些细胞发挥最大的抗癌作用。”目前,Kite Pharma公司正在进行6项CAR-T细胞的试验,针对B细胞白血病和淋巴瘤,以及恶性胶质瘤等疾病。伊萨哈是该公司科学顾问团队的成员,他依然和罗森 伯格保持合作关系,后者在该公司担任特别顾问。

Juno公司目前正在加紧开发两种第二代CAR技术,希望在未来能加强或抑制T细胞的活动, 以防副作用的发生。新的所谓“装甲”嵌合抗原受体能够通过与一种信号蛋白——如IL-12——协同作用,对抑制肿瘤的微环境起到削弱作用。IL-12蛋白 能够刺激T细胞的活动。Juno公司相信“装甲CAR”技术将会在固体瘤的治疗中发挥重要作用,在这类癌症的治疗中,肿瘤微环境和较强的免疫抑制机制会导 致抗肿瘤反应变得更加棘手。

与Juno公司一样,位于休斯敦的Bellicum Pharmaceuticals也在开发更为精细的下一代CAR-T细胞治疗技术。为了更好地控制CAR-T细胞引起的抗原活动,该公司将两个共刺激信号 域与抗原识别域分离,移到一个分离的分子开关上,从而可以用小分子药物rimiducid进行控制。这些T细胞被称为GoCAR-Ts,只有暴露在两种癌 细胞和这种小分子药物的情况下才能被完全激活。

齐 利格·伊萨哈和斯蒂芬?罗森伯格利用模块设计的方式构建了第一种CAR-T细胞,包括一种细胞外的特异性靶向癌细胞的抗体、一种膜运输组件和一种能加强 CAR-T细胞活动的胞内共刺激信号域。第二和第三代CAR-T细胞技术增加了细胞内的共刺激信号域,同时也增加了受体的数量,使T细胞攻击的靶向更加准 确,减少副作用。

除了对CAR-T细胞本身的组件进行改装之外,研究者还在尝试不同的方法,将受体引入患者的细胞内部。在德州大学安德森癌 症研究中心,劳伦斯?库珀(Laurence Cooper)及其同事正利用被称为“睡美人”的非病毒系统——从鱼类中获得的转座子——将基因转入到基因组中。库珀说:“这一系统利用电穿孔技术将‘睡 美人’系统的部件转入T细胞中。”他希望这一系统能比病毒载体更加简易且成本更低。

尽管CAR-T细胞一开始是作为单一药物治疗进行试验 的,但研究者也在考虑如何将CAR-T细胞与其他免疫疗法更好地结合起来。卡尔?朱恩教授告诉记者,通常一种药物上市需要8-12年的时间,而CAR T疗法从2010年第一次临床试验,很有可能在2017年通过美国药监局的批准,尽管现在大部分的研究主要关注发展到晚期、其他治疗方法已经无效的疾病, 但卡尔?朱恩表示CAR T技术是一种平台,300种癌症最后都可以通过CAR T产生不同的抗原来治疗,“这是一种有生命的药物,因为它进入人体后会自己继续繁殖”,这些新的免疫疗法能够在未来取代以往标准的治疗方法。

过 去几年中,制药界在抗癌技术领域十分活跃,6家公司参与的交易总额已经超过5亿美元。除了资金流入的潜力巨大之外,美国食品与药物管理局(FDA)采取的 措施也促进了该领域的发展。为了满足不断增长的医疗需求,FDA给予了CAR-T细胞疗法优先评估的待遇。许多这类疗法都获得了“罕见病疗法”和“突破性 疗法”的认证。快速的管理审核机制,反过来促进了技术得更快速开发和资金的更快流入。2014年11月,FDA给予了Juno公司的“JCAR015”以 “罕见病疗法”的认证;Kite公司开发的缓解非何杰金氏淋巴瘤的“KTE-C19”也获得了FDA和欧洲药品局的认证。宾夕法尼亚大学和 Novartis公司开发的“CTL019”(用于治疗急性淋巴性白血病)也于去年7月获得了“突破性疗法”的认证。

随着研究的深入,临床 试验的结果也不断给人带来希望。参与这场研究竞赛的科学家被这些试验结果所鼓舞,许多人都认为CAR-T细胞疗法是癌症治疗的未来。尽管卡尔?朱恩直言 CAR T疗法需要特殊的生态环境,如何把目前专业人员处理的复杂精细过程自动化流程化仍是一个很大的难题,但“这些试验正在宣告化学疗法走在被淘汰的道路上”。

染色体异常

染色体是组成细胞核的基本物质,是基因的载体。染色体异常(chromosome abnormalities)也称染色体发育不全(chromosome dysgenesis)。美籍华人蒋有兴(1956)查明人类染色体为46条,Caspersson等(1970)首次发表人类染色体显带照片。

美籍华人蒋有兴(1956)查明人类染色体为46条Caspersson等(1970)首次发表人类染色体显带

照片自1971

染色体异常

染色体异常

巴黎国际染色体命名会议以来,已发现人类染色体数目异常和结构畸变3000余种,目前已确认染色体病综合征100余种,智力低下和生长发育迟滞是染色体病的共同特征。

最常见的染色体疾病Down综合征(Down’ssyndrome)的新生儿发病率为1/700~1/600。除Down综合征之外,13三体综合征(trisomy13syndrome)的活婴发病率为1/2000,女性多于男性,患儿母亲平均生育年龄为31岁。18三体综合征(trisomy18syndrome)的活婴发病率为1/4000女性多见患者母亲平均生育年龄为34岁。脆性X染色体综合征(fragile-Xsyndrome)估计可使1/1500的男婴受累由于女性具有两条X染色体,受累率为50%,程度较轻Klinefelter综合征(Klinefelter’ssyndrome)的染色体表型为XXY,仅见于男性。Turner综合症的染色体为XO(45X)型,仅见于女性。Williams综合征的新生儿发病率为1/2万,Prader-Willi综合征的新生儿发病率为1/2万,Rett综合征的发病率为1/1.5万~1/1万,仅见于女性。

染色体是基因的载体,染色体病即染色体异常,故而导致基因表达异常机体发育异常。染色体畸变的发病机制不明,可能由于细胞分裂后期染色体发生不分离或染色体在体内外各种因素影响下发生断裂和重新连接所致。
1、物理因素:人类所处的辐射环境,包括天然辐射和人工辐射。天然辐射包括宇宙辐射,地球辐射及人体内放射物质的辐射,人工辐射包括放射辐射和职业照射等。
电离辐射因导致染色体不分离而引人注目。有试验证明,将受照射小鼠处于MⅡ中期的卵细胞和未受照射的同期卵细胞比 较,发现不分离在受照射组中明显增高,这一现象在年龄较大的小鼠中尤为明显。人的淋巴细胞受照射或在受照射的血清内生长,发现实验组三体型频率较对照组 高,并引起双着丝粒染色体异位、缺失等染色体畸变。
2、化学因素:人们在日常生活中接触到各种各样的化学物质,有的是天然产物,有的是人工合成,它们会通过饮食、呼吸或皮肤接触等途径进入人体,而引起染色体畸变。
3、生物因素:当以病毒处理培养中的细胞时,往往会引起多种类型的染色体畸变,包括断裂、粉碎化和互换等。
4、母龄效应:胎儿在6—7个月龄时,所有卵原细胞已全部发展为初级卵母细胞,并从第一次减数分裂前期进入核网期, 此时染色体再次松散舒展,宛如同前胞核,一直维持到青春期排卵之前。这种状态可能与合成卵黄有关。到青春期时,由于FSH的周期性刺激卵母细胞,每月仅一 个完成第一极体。次级卵母细胞自卵巢排出,进入输卵管,在管内进行第二次减数分裂达到分裂中期。此时如果受精,卵子便完成第二次减数分裂,成为成熟卵子, 与精子结合成为合子,从此开始新个体发育直至分娩。随着母龄的增长,在母体内外许多因素的影响下,卵子也可能发生许多衰老变化,影响成熟分裂中同对染色体 间的相互关系和分裂后期的行动,促成了染色体间的不分离。
5、遗传因素:染色体异常常可以表现为家族性倾向,这提示染色体畸变与遗传有关。
6、自身免疫性疾病:自身免疫性疾病似乎在染色体不分离中起一定作用,如甲状腺原发性自身免疫抗体增高与家族性染色体异常之间有密切相关性。[1]

分类

⒈数量畸变包括整倍体非整倍体畸变,染色体数目增多、减少和出现三倍体等。
⒉结构畸变染色体缺失易位倒位、插入、重复和环状染色体等又可分为常染色体畸变,如Down(21三体)综合征Patau(13三体)综合征和Edward(18三体)综合征等,以及性染色体畸变如Turner综合征(XO)和先天性睾丸发育不全等。
最常见的染色体疾病Down综合征病理改变:患者脑重约较正常轻10%仅有简单的脑回结构,额叶小,颞上回皮质薄,脑白质髓鞘形成晚皮质神经元发育不全和分化低等。40岁以上患者可见Alzheimer病样神经原纤维缠结及老年斑

3临床表现编辑

Down综合症(Down’ssyndrome)也称21三体综合征(trisome21syndrome)和先天愚型等。这是人类最常见

染色体异常

染色体异常

染色体疾病新生儿发病率为1/700~1/600是精神发育迟滞最常见的原因占严重智力发育障碍病例的10%。

Seguin(1846)首先报告本病的临床表现,LangdoneDown(1866)对本病作了全面的描述,英国学者后来将本病称为Down综合症,Lejeune等(1959)证明本病由21号染色体三倍体引起并提倡用21三体综合症的名称在1970年丹佛会议上得到承认。
除Down综合症之外,其他染色体发育不全包括Patau综合征18三体综合征、猫叫(Criduchat)综合征、脆性X染色体综合征、环状染色体综合征、Klinefelter综合征、Turner综合征、Colpocephaly综合征、Williams综合征、Prader-Willi和Angelman综合征、Rett综合征等。

Down综合征

(Down’ssyndrome)的临床特征如下:⑴Down综合症患儿出生时即有某些病理特征,随年龄增长症状变得明显。颅面部表现为圆头低鼻梁上颌

染色体异常

染色体异常

骨发育不全可致面部扁平,呈微张状舌体肥大有深裂,常伸出口外故称伸舌痴呆。内眦赘皮常遮盖部分,内眦患者裂可轻微向上向外倾斜形成蒙古样,面容耳朵位置低呈卵圆形,耳垂小可见虹膜灰-白色斑点即布鲁什菲尔德点(Brushfield’sspots),囟门明显闭合晚。

愚钝综合征

患儿出生时较正常新生儿的平均身长略短,随年龄增长差异愈发明显成年患者身高很少超过正常10岁儿童。手呈短粗状,手掌宽只有一条横纹,表现为水平掌褶纹(通贯手)及其他特征性皮纹改变,如小指短而内屈呈单一褶纹(即第五指为两节),肌张力减低多数患儿3~4岁仍不会走路,婴幼儿反应迟钝或引不出进食困难患儿智力及精神发育明显异常,智商为20~70,平均40~50多在Gaussian曲线以下,90%的患儿5岁时才会说话。大多数表现沉静、温顺、易让人接近,寿命可达40岁。
有些患者可见白内障先天性心脏病或心脏病继发,脑栓塞和脑脓肿,胃肠道异常如,十二指肠狭窄等寰枢关节不稳定,剧烈运动可导致脊髓压迫,中幼粒细胞和淋巴细胞白血病的发生率高于常人患者40多岁时几乎普遍发生Alzheimer病,出现注意力不集中、寡言少语视空间定向力差记忆力及判断力下降和癫痫发作等。

13三体综合征

13三体综合征(trisomy13syndrome)也称Patau综合征,活婴发病率为1/2000,女性多

染色体异常

染色体异常

于男性,患儿母亲平均生育年龄为31岁。

患儿表现为小头前额凸出、小眼、虹膜缺损角膜浑浊、嗅觉缺失耳位低唇腭裂、毛细血管瘤、多指(趾)畸形、手指弯曲、足跟后凸右位心、脐疝听力缺陷、肌张力过高及严重精神发育迟滞等患儿多死于儿童早期。

18三体综合征

18三体综合征(trisomy18syndrome)的活婴发病率为1/4000,女性多见,患者母亲平均生育年龄为34岁。
患儿表现为生长迟缓、上睑下垂眼睑畸形耳位低小嘴小下颏皮肤斑点示指超过中指并握紧拳头、并指(趾)畸形、摇篮底足(rocker-bottomfeet)足趾大而短、室间隔缺损脐疝或腹股沟疝、胸骨短、小骨盆和肌张力增高,偶有癫痫发作、严重精神发育迟滞等常死于婴儿早期。

猫叫综合征

猫叫综合征(Criduchatsyndrome)是5号染色体短臂缺失所致。
患儿生后数周至数月出现小猫叫样哭声,严重精神发育迟滞,眼间距过远内眦赘皮折叠(epicanthalfolds)、短头畸形、满月脸、反先天愚型样睑裂歪曲,小颌肌张力减退和斜视等。

脆性X染色体综合征

脆 性X染色体综合征(fragile-Xsyndrome)是X染色体有异常易断裂的脆性部位Martin和Bell(1943)最先报道一个X连锁遗传的 精神发育迟滞大家系Lubs(1969)发现这个家系患者X染色体长臂末端有脆弱位点,证实此位点有不稳定遗传的CGG重复序列。正常人重复序列为 43~200个,患者超过200个,多余的序列可灭活编码RNA结合蛋白基因,影响蛋白表达而出现症状。
本综合征是导致遗传性精神发育迟滞最常见的原因估计可使1/1500的男婴受累。由于女性具有两条X染色

染色体异常

染色体异常

体,受累率为50%程度较轻。据估计10%以上的男性遗传性精神发育迟滞患儿有异常脆性X染 色体有时女性也受累但病情较轻,Rousseau等描述了一种简单敏感的实验方法,采用DNA分析技术在孕期及出生后对患儿进行诊断由于重复三联密码子的 长度与智力发育迟滞的程度有关因此脆性X染色体变异型偶见于智力正常的男性,患者外孙可患病。 患儿表现为典型的三联征:精神发育迟滞,特殊容貌(如长 脸、大耳宽额头鼻大而宽和高腭弓)和大睾丸等患儿身高正常,大睾丸一般出现于8~9岁,85%的患儿可有智力低下,多为中等程度常表现为行为异常,多出现 于青春期前,常见自伤性行为、多动及冲动性行为以及刻板和怪异动作、多动症多言癖,孤独症患者可有特有的拍手动作9%~45%的患儿可出现癫痫发作。 DNA检查可确诊。⑸环状染色体:环状染色体(ringchromosome)表现为精神发育迟滞伴各种身体畸形。

Klinefelter综合征

Klinefelter综合征(Klinefelter’ssyndrome)的染色体表型为XXY仅见于男性。患者身材高大,表现类似无睾丸者的外表,宽、头发及体毛稀疏、音调高、乳房女性化和小睾丸肌张力减低通常伴精神发育迟滞但程度较轻本病并发精神病哮喘内分泌功能异常如伴糖尿病几率较高。

Turner综合征

Turner综合征的染色体为XO(45X)型仅见于女性。患者身材矮小颈部有蹼脸呈三角形,小下颏乳头间距宽,指(趾)弯曲肘外翻和指甲发育不全,可伴五官距离过远内眦赘皮折叠,可有性发育迟缓及中度精神发育迟滞等。

Colpocephaly综合征

Colpocephaly综合征是少见的脑部畸形,病因很多有些是8号染色体三倍体嵌合所致,常误诊为多种类型的脑室扩张伴脑发育异常。患者表现为精神发育迟滞、痉挛状态和癫痫发作视神

染色体异常可检查发现

染色体异常可检查发现

经发育不全导致视觉异常等侧脑室枕角显著扩张,皮质灰质边缘重叠增厚,白质变薄。

Williams综合征

Williams综合征是7号染色体编码弹性蛋白基因区域存在微小缺失,新生儿发病率为1/2万,由Williams首先描述目前还不清楚脑部是否有特征性病变,曾有文献报道一例35岁的病人活检,除Alzheimer病改变外未发现其他脑异常。
患者精神发育迟滞较轻,音乐能力早熟有非凡的音乐才能对乐谱有惊人的记忆力,听一遍交响乐可全部记住;有些患者可写出大段的描写文字措辞和内容正确,但不会描绘简单事物患儿发育迟缓外貌独特,如:宽嘴、杏仁眼、孔上翻、耳朵小而尖,称为“小妖精样”外貌;性格温和对听觉刺激敏感,言语交谈能力获得较晚,可有视空间和运动能力缺陷。可有心血管畸形如主动脉瓣狭窄。

Prader-Willi及Angelman综合征

Prader-Willi综合征新生儿发病率为1/2万两性患病率均等为15号染色体q11-q13缺失所致,可采用细胞发生分析与DNA分析相结合的方法检测此染色体缺陷70%的病例是父系X染色体非遗传性缺失所致。
患儿表现为肌张力降低、腱反射消失、身材矮小、面容变形、生殖器明显发育障碍,出生时可有关节弯曲等1年后出现明显精神发育迟滞或智力低下(hypomentia),由于过度进食变得肥胖
Angelman综合征是15号染色体q11-q13缺失所致,与Prader-Willi综合征不同的是本病由母系单基因遗传缺

可产前检查预防

可产前检查预防

陷所致患儿表现为严重精神发育迟滞、小头畸形及早期出现癫痫发作等,抗癫痫药治疗不敏感,出现少见的牵线木偶样姿态和运动障碍,常想大笑或微笑样旧称“快乐木偶综合征”。

Rett综合征

Rett综合征由Rett首先(1966)描述,病因不明,呈X染色体显性遗传有人推测代谢机制参与致病发病率为1/1.5万~1/1万仅见于女性,可存活多年男性为纯合子,常不能存活。
若为女性,出生时及生后早期发育正常6~15个月时手部自主运动丧失,以后交流能力丧失身体发育迟滞、头颅增大等,典型症状为:手部徐动搓丸样刻板样运动,逐渐出现共济失调下肢强直最终丧失行走及语言能力可出现发作性过度换气和屏气、夜间呼吸节律正常和痫性发作等。
本病可误诊为Kanner孤独综合征,两者的不同点是Rett综合征早期即运动能力丧失,无注意力不集中及眼球联合运动消失。

并发症

染色体异常种类繁多,临床症状体征复杂多样,神经系统以外的表现各不相同具体详情可参见各病临床表现。

区分

主要根据患儿的特征性症状、体征及染色体检查。检出染色体异常可确诊。21三体所致的Down综合征与染色体易位导致Down综合征的临床表现很难区分,二者有很强的关联性,与母亲年龄有关21三体患儿母亲通常生育年龄较大,但高龄或年轻孕妇染色体易位的发生率都较低。Down综合征亚型,如嵌合型有些细胞染色体正常,有些异常。嵌合型患者可有Down综合征的典型表现有些患者智力正常。

5检查编辑

实验室检查

⒈Down综合征血清学检查可见血清素降低、白细胞中碱性、磷酸酶增高、红细胞二磷酸葡萄糖增高、过氧化物歧化酶增高50%、但与患者发育异常及智力低下无关。
⒉约1/3的Down综合征患儿母亲在妊娠4~6个月时血清甲胎蛋白含量增高,血清绒毛膜促性腺激素含量增

产前检查是关键

产前检查是关键

高、雌三醇含量降低,可提示胎儿Down综合征检查结果。阳性孕妇应行羊膜囊穿刺,检测患者羊水细胞或染色体。

其他辅助检查

孕妇行羊膜囊穿刺可发现羊水细胞染色体异常可以早期筛查Down综合征患儿及其他染色体发育不全。
染色体检查可用荧光原位杂交技术(fluorescentinsituhybridizationtechnique)检测患者羊水细胞或染色体,如Down综合征可发现21号染色体为三倍体。

治疗

染色体异常治疗困难疗效不满意,导致的先天性智能障碍的治疗,也尚无有效药物,可尝试中药治疗与康复训练。

产前检查

不同类型染色体发育不全预后不尽相同,多数预后不良智力低下和生长发育迟滞是染色体病的共同特征。染色体发育不全治疗困难疗效不满意预防显得更为重要预防措施包括推行遗传咨询、染色体检测、产前诊断和选择性人工流产等,防止患儿出生。孕妇应该定期做产前检查,如果胎儿有问题,至少能及早发现。抽羊水诊断是能检验胎儿是否患有先天染色体缺陷的其中一个方法。

染色体核型命名如下:正常男性为46,XY,正常女性为46,XX。21三体综合征(唐氏综合征)由于有一条额外的21号染色体(21三体),核型命名为男性47,XY,+21 ;女性命名为47,XX,+21 .染色体易位也可导致21三体综合征,典型的14/21平衡易位携带者母亲写为45,XX,t(14q;21q).易位染色体分别来自14q和21q(在该染色体上,q为长臂),短臂(p)已丢失.短臂缺失的5号染色体(又称为5p缺失综合征),女性的核型为46,XX,5p-.
活婴中染色体异常的发生率约为0.5%.这些染色体异常者均能在产前得以诊断.然而有创性产前诊断方法其弊大于利.因此,产前诊断仅用于高危人群.
孕妇高龄是产前细胞遗传学诊断的最常见指征.虽然染色体异常可见于各年龄组的孕妇,但随着年龄的增大,子代三体核型发生率随之增加,35岁以后呈指数级递增(表247-1),至今原因不明.由于自然流产因素,孕16~18周检出的胎儿染色体异常的发生率较存活新生儿高30%,分娩年龄在35岁以上者均应作产前诊断.然而,年龄界限是相对的,年龄较小的妇女也可考虑行产前诊断.
母亲血清异常标志物提示胎儿有21三体综合征及18三体综合征风险增高,可考虑作羊膜穿刺术(见下文).  已有异常染色体的儿童是作产前诊断的指征.如果一对夫妇已有一个存活孩子是21三体,其本次分娩年龄在30岁以下,那么再次怀21三体胎儿的风险约为 1%.对于30岁以上者,其再次怀21三体胎儿的风险与孕妇实际年龄相关(表247-1).该表假设患者没有携带罗伯逊易位的夫妇,资料仅限于其他三体核型,但子代再次染色体异常的风险大约增加1%.某些染色体异常(例如45,X;三倍体;新重排)并不增加下一次妊娠的风险.对于即使无风险增加的夫妇,如果他们有顾虑心理,也可作产前诊断.
一对夫妇可能会出现有一个表型异常但染色体状况未知的孩子,表型异常通常与染色体异常有关,这种情况会出现在30%的活婴中,而表型正常的死婴中会有5%的染色体异常.如果前一个孩子的不正常是由于异常染色体所致则有指征作产前诊断.
父母染色体异常增加了子代染色体异常的风险.父代平衡重组包括易位(罗伯逊或互换易位)和倒位(臂内和臂间倒位), 他们往往表型正常但应作遗传咨询并考虑作产前诊断.常染色体非整倍性夫妇较少见.从理论上讲,非整倍体父母的子代约50%也为非整倍体.但是母亲为21三 体者,其子代为三体型的发生率为1/3.父亲为21三体型者均不育.性染色体三体型(如47,XXY)是很常见的,他们往往伴有生育力下降.性染色体三体型的父母,其子代为非整倍体者罕见.任何具有非整倍性染色体或完全嵌合型染色体的夫妇均应作产前诊断.染色体异常的夫妇通常是在对多次自然流产或子代异常或不孕症的病因筛查中得到诊断.
反复自然流产常 提示染色体异常.至少有50%早期自然流产的胎儿染色体异常;其中约1/2是三倍体.如果首次流产的胎儿为非整倍体,再次流产的胎儿也可能为非整倍体,但 这种异常可以不在同一染色体上发生.三体症(如16三体)妊娠可能是致死的并常导致流产,但再次妊娠可能会出现表型异常和其他三体型(如18三体)的活 婴.曾有非整倍体活婴分娩史者,再次妊娠非整倍体活婴的风险增加.然而,非整倍体反复自然流产者,究竟是否增加以后非整倍体活婴的风险仍不清楚.一些遗传 学家认为,反复自然流产应作为产前诊断的指征;必要时作夫妇双方染色体重组检测

染色体异常的原因1、男性也可能造成胚胎染色体异常的原因:男性长期服用药物,是会影响精子品质,并造成胎儿之不良 影响。在正常情况下,睾丸组织与流经睾丸的血液之间有一个防护层,医学上称为血睾屏障。这一屏障可阻止血液中某些物质进入睾丸。但是很多药物却能通过血睾 屏障,影响精卵健康结合。如常见的一些免疫调节剂,等药物,其毒性作用强,可直接扰乱精子DNA的合成,包括使遗传物质成分改变,染色体异常和精子畸形。 像男性不孕症,妇女习惯性流产(早期胚胎丢失),其中部分原因就是男性精子受损的结果。
染色体异常的原因2、这些药物还可随睾丸产生的精液通过性生活排入阴道,经阴道粘膜吸收后而进入血液循环,使低体重 儿和畸形胎的发生率增高,增加围产期胎儿的死亡率。因此,在怀孕前的2~3个月和怀孕期,先生用药一定要小心,除非夫妻中有染色体异常的问题,认为若你有 这类疑虑建议夫妻双方接受抽血检查染色体有无异常。
染色体异常的原因3、怀孕的前三个月,是流产的高危险期,这种自发性的流产,多半是胎儿染色体异常所致,是一种自然 淘汰。如果不是胎儿染色体异常的自然淘汰现象,而是因为孕妇本身的问题导致流产,根本之计就是找出问题,对症下药,才能避免再次流产。萎缩卵,葡萄胎是为 胎儿的染色体异常所致:萎缩卵,葡萄胎=是萎缩性胚胎.至于萎缩卵发生的原因多为胚胎本身的问题

江西发现一例人类罕见异常染色体,此例染色体经实验鉴定,属世界首次发现。那么,这异常染色体是怎么形成呢?
江西省妇幼保健院近日从一名3岁男孩身上发现一例人类罕见异常染色体核型:46,XY,dup(4)(p12p16)。据医院产前诊断中心主管技师李宇中介绍,这一异常染色体经中国医学遗传学国家重点实验室鉴定,属世界首次发现。
李宇中分析认为,这一染色体可能是在减速分裂时,同源染色体之间非对等交换或染色单体之间非对等交换形成重复片段而产生。根据基因的致病性程度,可能会导致患者先天性的非进行性智力低下,生长发育迟缓,并伴有五官、四肢、皮纹和内脏等方面的多发畸形症状。[3]

 

 

如何阅读质粒图谱

载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。
一、一个合格质粒的组成要素
复制起始位点Ori,即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。
抗生素抗性基因:可以便于加以检测,如Amp+ ,Kan+
多l克隆位点:MCS克隆携带外源基因片段
P/E:启动子/增强子
Terms:终止信号
加poly(A)信号:可以起到稳定mRNA作用

 

二、如何阅读质粒图谱
第一步:首先看Ori的位置,了解质粒的类型(原核/真核/穿梭质粒)
            Ori的箭头指复制方向,其他元件标注的箭头多指转录方向(正向)。
第二步:再看筛选标记,如抗性,决定使用什么筛选标记:
(1)Ampr:水解β-内酰胺环,解除氨苄的毒性。
(2)tetr :可以阻止四环素进入细胞。
(3)camr:生成氯霉素羟乙酰基衍生物,使之失去毒性。
(4)neor(kanr):氨基糖苷磷酸转移酶,使G418(卡那霉素衍生物)失活。
(5)hygr:使潮霉素β失活。
第三步:看多克隆位点(MCS)。它具有多个限制酶的单一切点,便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入,会导致某种标志基因的失活,而便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。
第四步:再看外源DNA插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10Kb的外源DNA片段。一般来说,外源DNA片段越长,越难插入,越不稳定,转化效率越低。
第五步:是否含有表达系统元件,即启动子-核糖体结合位点-克隆位点-转录终止信号。这是用来区别克隆载体与表达载体。克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。选用那种载体,还是要以实验目的为准绳。

 

相关概念
启动子-核糖体结合位点-克隆位点-转录终止信号
启动子-促进DNA转录的DNA顺序,这个DNA区域常在基因或操纵子编码顺序的上游,是DNA分子上可以与RNApol特异性结合并使之开始转录的部位,但启动子本身不被转录。
增强子/沉默子-为真核l基因组(包括真核病毒基因组)中的一种具有增强邻近基因转录过程的调控顺序。其作用与增强子所在的位置或方向无关。即在所调控基因上游或下游均可发挥作用。沉默子-负增强子,负调控序列。
核糖体结合位点/起始密码/SD序列(Rbs/AGU/SDs):mRNA有核糖体的两个结合位点,对于原核而言是AUG(起始密码)和SD序列。
l 转录终止顺序(终止子)/翻译终止密码子:结构基因的最后一个外显子中有一个AATAAA的保守序列,此位点down-stream有一段GT或T富丰 区,这2部分共同构成poly(A)加尾信号。结构基因的最后一个外显子中有一个AATAAA的保守序列,此位点down-stream有一段GT或T富 丰区,这2部分共同构成poly(A)加尾信号。

 

三、载体及其分类
载体:即要把一个有用的基因(目的基因——研究或应用基因)通过基因工程手段送到生物细胞(受体细胞),需要运载工具(交通工具)携带外源基因进入受体细胞,这种运载工具就叫做载体(vector)。
P.S.基因工程所用的vector实际上是DNA分子,是用来携带目的基因片段进入受体细胞的DNA。
载体的分类
按 功能分成:(1)克隆载体:都有一个松弛的复制子,能带动外源基因,在宿主细胞中复制扩增。它是用来克隆和扩增DNA片段(基因)的载体。(所以有时实验 时扩增效率低下,要注意是不是使用的严谨型载体)(2)表达载体:具有克隆载体的基本元件(ori,Ampr,Mcs等)还具有转录/翻译所必需的DNA 顺序的载体。
按进入受体细胞类型分:(1)原核载体(2)真核载体(3)穿梭载体(sbuttle vector)指在两种宿主生物体内复制的载体分子,因而可以运载目的基因(穿梭往返两种生物之间)。  P.S. 穿梭质粒含原核和真核生物2个复制子,以确保两类细胞中都能扩增。
基因工程载体的3个特点:
(一)都能独立自主的复制:载体DNA分子中有一段不影响它们扩增的非必需区域,如MCS,插在其中的外源DNA片段,能被动的跟着载体一起复制/扩增,就像载体的正常成分一样。
(二)都能便利的加以检测: 如载体的药物抗性基因,多是抗生素抗性基因,将受体细胞放在含有该抗生素培养板上培养生长时,只有携带这些抗性基因的载体分子的受体细胞才能存活。
(三)都能容易进入宿主细胞中去,也易从宿主细胞中分离纯化出来。

 

四、载体的选择和制备
选择载体主要依据构建的目的,同时要考虑载体中应有合适的限制酶切位点。如果构建的目的是要表达一个特定的基因,则要选择合适的表达载体。
    载体选择主要考虑下述3点:
1、 构建DNA重组体的目的,克隆扩增/表达表达,选择合适的克隆载体/表达载体。
2、载体的类型:
(1)克隆载体的克隆能力-据克隆片段大小(大选大,小选小)。如<10kb选质粒。
(2)表达载体据受体细胞类型-原核/真核/穿梭,E.coli/哺乳类细胞表达载体。
(3)对原核表达载体应该注意3点:
    ①选择合适的启动子及相应的受体菌;
    ②用于表达真核蛋白质时注意克服4个困难和阅读框错位;
    ③表达天然蛋白质或融合蛋白作为相应载体的参考。
3、载体MCS中的酶切位点数与组成方向因载体不同而异,适应目的基因与载体易于链    接,不产生阅读框架错位。选用质粒(最常用)做载体的4点要求:
①选分子量小的质粒,即小载体(1-1.5kb)→不易损坏,在细菌里面拷贝数也多
(也有大载体);
②一般使用松弛型质粒在细菌里扩增不受约束,一般10个以上的拷贝,而严谨型
质粒<10个。
③必需具备一个以上的酶切位点,有选择的余地;
④必需有易检测的标记,多是抗生素的抗性基因,不特指多位Ampr(试一试)。
无论选用哪种载体,首先都要获得载体分子,然后采用适当的限制酶将载体DNA进行切割,获得分子,以便于与目的基因片段进行连接。
二、pET32a(+)自身载体表达的片段大小
The expected fusion protein expressed encoded by just the pET-32a(+) vector alone would be around 20.4 kDa. The Trx-tag by itself would contribute 12kDa. The rest is due to the two His-tags (0.8kDa each) and the S-tag (1.7kDa). The remaining 5.1kDa is due to the intervening(?) 54 amino acids between the tags and until the stop codon.
三、pET32系列载体的载体序列地址
pET-32a(+) Vector Sequence
http://www.embl-hamburg.de/~geer … ET/pET-32a_seq.html
pET-32b(+) Vector Sequence
http://www.embl-hamburg.de/~geer … ET/pET-32b_seq.html
pET-32c(+) Vector Sequence
http://www.embl-hamburg.de/~geer … ET/pET-32c_seq.html

 

四、pET系列载体阅读方法

 

ori是复制起始点,细的黑箭头是几个不同的转录区,其箭头方向不同,说明每个表达产物(如kan抗性基因、 LacI等)都有独立的promoter,有时与T7 promoter方向相反。粗的黑箭头是MCS,用于目的基因的插入,箭头方向表明目的基因的转录方向,它的转录方向可以与其它几个不同的转录区相同,也 可以不同,如Kan抗性基因、LacI的方向是一样的,可能与调控相关,不同的载体是不一样的。一个载体可只看它的启动子到终止子那一段,其它的可以考虑 少些。
五、pET表达菌株的相关信息
( DE3 )指宿主为 λ DE3 溶原菌,其染色体上带有一拷贝由 lacUV5 启动子控制的 T7 RNA 聚合酶基因。这类菌株适用于从克隆到 pET载体的目标基因生产蛋白。命名为 pLysS 和 pLysE 的宿主菌带有编码 T7 溶菌酶(为 T7 RNA 聚合酶的天然抑制物)的 pET 相容性质粒。带有 pLysS的细胞产生少量溶菌酶,而 pLysE 宿主菌产生更大量酶。这些菌株用于在诱导前抑制 T7 RNA 聚合酶的基础表达,这样可以稳定编码影响细胞生长和活力的目标蛋白的 pET 重组体。带有 pLacI的宿主菌产生额外的抑制 pETBlue 和 pTriEx 载体基础表达的 lac 阻遏蛋白。 λ DE3 溶原化试剂盒用于制备其它遗传背景的新表达宿主菌。
AD494 菌株为硫氧还蛋白还原酶 ( trxB ) 突变菌株,能够在胞浆内形成二硫键,提供了生产正确折迭的活性蛋白的潜力。 TrxB 突变可用卡那霉素选择,因此该菌株建议用于带氨苄抗性标记 bla 的质粒。
B834 为 BL21 的亲本菌株。这些蛋白酶缺陷宿主菌为甲硫氨酸营养缺陷型,可用 35 S- 甲硫氨酸和硒代甲硫氨酸对目标蛋白进行高特异活性标记,从而用于结晶学研究。
BL21 应用最广的宿主菌来源,具有 lon 和ompT 蛋白酶缺陷的优点。
BL21 TrxB 菌株在蛋白酶缺陷 BL21 背景上具有与 AD494 菌株相同的硫氧还蛋白还原酶突变( trxB ) 。由于 trxB 宿主有利于胞浆内二硫键形成,它们的使用可增加正确折迭的蛋白组分。 TrxB 突变可用卡那霉素选择,因此该菌株建议用于带氨苄抗性标记 bla 的质粒。
BLR 为 BL21 的 recA – 衍生菌株,能够改善质粒单体产量,有助于稳定含有重复序列或其产物能够引起 DE3 噬菌体丢失的目标质粒。
HMS174 菌株在 K-12 背景上提供了 recA 突变。与 BLR 一样,这些菌株能够稳定其产物能够引起 DE3 噬菌体丢失的某些目标基因。
NovaBlue 适合 用作初始克隆宿主菌的 K-12 菌株,具有高转化效率、蓝 / 白斑筛选能力(与合适质粒)和导致优质质粒 DNA 高产的recA endA 突变。由于存在 F 附加体编码的 lacI q 阻遏蛋白, NovaBlue 的 DE3 溶原菌是一个非常有用的严紧型宿主菌。
Origami 为 K-12 衍生的宿主菌,硫氧还蛋白还原酶突变 ( trxB ) 和谷胱甘肽还原酶 ( gor ) 基因均为突变,能够大大增强胞浆内二硫键的形成。研究表明即使总体表达水平相似, Origami ( DE3 )表达的活性蛋白比其它宿主菌高 10 倍以上。 Origami 宿主菌与氨苄抗性质粒相容,可用于 pET-32 载体,硫氧还蛋白标签能够进一步增强在胞浆内形成二硫键。 TrxB 和 gor 突变可分别用卡那霉素和四环素选择,因此该菌株建议用于带氨苄抗性标记 bla 的 pET 质粒。
Origami B 宿主菌来源于 BL21 lacZY 突变株,还带有与原始 Origami 菌株相同的 TrxB / gor 突变。 Origami B 菌株集 BL21 、Tuner 和Origami 宿主菌的优点于一体。 TrxB 和 gor 突变可分别用卡那霉素和四环素选择,因此该菌株建议用于带氨苄抗性标记 bla 的pET 质粒。
Rosetta 宿主菌从 BL21 衍生而来,可增强带有大肠杆菌稀有密码子的真核蛋白的表达。该菌株通过一个相容性氯霉素抗性质粒补充密码子 AUA 、 AGG 、 AGA 、 CUA 、 CCC 和 GGA 的 tRNAs 。这样 Rosetta 菌株提供了“万能”的翻译,从而避免因大肠杆菌密码子使用频率导致的表达限制。 tRNA 基因由它们的天然启动子驱动。在 Rosetta ( DE3 ) pLysS 和 Rosetta ( DE3 ) pLacI 中,稀有 tRNA 基因存在于分别带有 T7 溶菌酶和 lac 阻遏基因的同一质粒上。
Tuner 菌株为 BL21 的 lacZY 缺失突变株,能够调整培养物中所有细胞的蛋白表达水平。 lac 通透酶( lacY )突变使得 IPTG 均匀进入群体所有细胞,从而具有浓度依赖、水平均一的诱导表达。通过调整 IPTG 浓度,表达可从极低水平调节到极强、完全诱导的表达水平(通常与 pET 载体相关)。低水平表达有时可能增强难表达蛋白的溶解性和活性。 Tuner ( DE3 ) pLacI 菌株与 pETBlue 和 pTriEx 载体的表达相容。
六、pGEX载体的特点
pGEX特点就是带有GST标签,可以增加目的蛋白的溶解度,别的没什么特点,属于大众型载体,目前也较常使用。

世界顶级生物技术公司排名(1-20位)

世界顶级生物技术公司排名(1-20位)
1.按照市值排序,因为市值是最好获得也是更新最快的指标。但是市值不能全面反应企业的情况,而且股价变化很快,所以这个排名只能作参考。
2.市值数据是按照2012年6月18日的股价计算的。
3.关于“生物技术企业”的定义其实比较模糊。许多传统大型药企都会涉足生物制药领域,这里列出的主要是典型的生物制药企业和生物技术企业。稍后再整理个制药企业排行吧。
4. 这里列出的都是独立的生物技术公司,不包括被并购的企业。比如曾开发出人工胰岛素的生物技术公司基因泰克(Genentech)就被罗氏制药在2009年 3月12日以468亿美元的价格收购,收购前Genentech曾是仅次于Amgen的第二大独立生物技术公司,因为已经被收购,所以不单独列出了。这两 年生物制药领域的收购案非常多,没办法,经济不景气,大公司收入不长,小公司融不到钱,兼并几乎是唯一出路了,这和十年前中国大学之间的合并潮如出一辙。
5.20家企业中:生物医药类企业 18家,研发服务解决方案提供商 1家, 设备制造/技术支持 1家
按地区划分:美国 17家, 欧洲 2家,澳洲 1家
6.数据来源:Google Finance, Forbes
1 Amgen安进
总部所在地:千橡,加州,美国
股价(或估值):$554亿
雇员数:17,500
公司性质:公共(纳斯达克)
业务领域:生物制药
简 介:Amgen创立于1980年,是世界上最早也是目前最大的生物制药企业之一,当之无愧的行业先行者。 20世纪后10年是生物技术飞速发展的10年, 也是安进公司快速成长的10年。1989年6月安进公司的第一个产品重组人红细胞生成素(erythropoietin,简称EPO)获得美国FDA批 准,用于治疗慢性肾功能衰竭引起的贫血和HIV感染治疗的贫血.1991年2月公司第二个产品重组粒细胞集落刺激因子(filgrastim,G- CSF)获得美国FDA批准,其适应证为肿瘤化疗引起的嗜中性白细胞减少症。安进公司的这两个全球商业化最为成功的生物技术药物EPO(商品名 EPOGEN)和G-CSF(商品名NEUPOGEN),不仅造福了无数血液透析患者和癌症化疗患者,也为公司带来了巨额的利润,公司也据此迅速发展壮 大。(只是Amgen的当家EPO命运坎坷,在最糟糕的时候为了从强生融资1900万就把EPO的所有海外销售给了强生才得以生存,没有这1900万也很 可能就没有现在这个约千亿市值的巨大的家伙。)1992年安进公司首次跻身财富500强,当年公司产品销售首次突破10亿美元。2000年财富500强排 名,安进公司排在455位。
2 Gilead Sciences吉利德
总部所在地:福斯特市,加州,美国
股价(或估值):$381亿
雇员数:4,500
公司性质:公共(纳斯达克)
业务领域:生物制药
简 介:吉利德成立于1987年,是一家独立的生化公司,致力于为患者提供更快更好的治疗方案。其开发和销售的药物广泛应用在治疗病菌传染方面,包括病毒传 染、真菌感染和细菌传染,公司还特别关注癌症的治疗。公司拥有liposomal药物专门对付技术,该技术的利用使药物对患者更加安全、简单和有效。
3 Biogen Idec生物基因
总部所在地:剑桥,麻省,美国
股价(或估值):$335亿
雇员数:5,000
性质:公开(纳斯达克)
业务领域:生物制药
简介:百健艾迪利用尖端科学发现、开发、制造和销售重点用于治疗严重的神经系统疾病的生物制品。是世界上历史最悠久的独立生物技术公司和财富500强公司,收入超过50亿美元。
4 Celgene赛尔基因
总部所在地:塞米特,纽约州,美国
股价(或估值):$291.4亿
雇员数:4,460
性质:公开(纳斯达克)
业务领域:生物制药
简介:主要从事与发明,开发及商品化口服、小颗粒治疗癌症及免疫疾病的药物。
5 CSL Limited
总部所在地:墨尔本,澳大利亚
市值:$184.8亿
雇员数:10,411
性质:公开(澳洲证交所)
业务领域:生物制药
简介:CSL Limited是一家全球化的专业生物制药公司,致力于研发、生产和销售以蛋白质为基础的药物,以治疗和预防严重的人类疾病。CSL集团在研发和生产疫苗和血浆蛋白生物治疗制剂方面拥有90多年的技术经验,以满足尚未得到满足的医疗需求。
6 Shire夏尔
总部所在地:都柏林,爱尔兰
股价(或估值):$167亿
雇员数:5,251
性质:公开(纳斯达克)
业务领域:生物制药
简介:这家欧洲企业成立于1986年,最初的产品是针对儿童多动症的药物。
7 Alexion Pharmaceuticals亚力兄
总部所在地:切希尔,康涅狄格州,美国
股价(或估值):$174.4亿
雇员数:1,008
性质:公开(纳斯达克)
业务领域:生物制药
简 介:Alexion Pharmaceuticals致力于为罹患重症致命疾病的患者开发生产救命药物。Alexion公司从事治疗药物的探索、开发和推广,这些药物用于治疗 种类广泛的严重疾病,包括血液系统和肾脏疾病、移植、癌症和自身免疫疾病。Soliris是Alexion公司首个上市的药物。Alexion公司正在评 估Soliris治疗其他适应证的可能性、以及依库珠单抗其他剂型治疗附加临床适应证的可能性,其他处于早期开发阶段的抗体备选产品也正在开发。
8 Vertex Pharmaceuticals福泰
总部所在地:剑桥,麻省,美国
股价(或估值):$119.3亿
雇员数:2,000
性质:公开(纳斯达克)
业务领域:生物制药
9 Regeneron Pharmaceuticals再生元
总部所在地:塔里敦(Tarrytown),纽约州,美国
股价(或估值):$108.3亿
雇员数:1,729
性质:公开(纳斯达克)
业务领域:生物制药
简 介:Regeneron Pharmaceuticals公司成立于1988年,从事研究,开发和销售治疗严重疾病的药物。直至2010年12月31日,公司拥有销售产品,包括在 美国的处方药治疗冷凝比林相关的周期综合症的皮下注射剂ARCALYST (rilonacept)。
10 Life Technologies 生命科技
总部所在地:卡尔斯巴德(Carlsbad),加州,美国
股价(或估值):$76.2亿
雇员数:10,400
性质:公开(纳斯达克)
业务领域:实验试剂与器材,测序技术
简 介:Life Technologies Corporation 是一家致力于改善人类生存环境的全球性生物技术公司。该公司的仪器、耗材和服务可协助研究人员加快推进科学和医学的发展,从而让人们的生活变得更加美好。 该公司的客户遍及生物学各个领域,包括筛选与转化研究、分子药物、干细胞治疗、食品安全和动物保健以及21世纪的法医鉴定等。该公司生产供分子诊断和仅供 研究使用的产品。Life Technologies的业界领先品牌,包括创新型Applied Biosystems和Ion Torrent品牌仪器以及Invitrogen、Gibco、Ambion、Molecular Probes和Taqman等被全球各地的生命科学实验室所广泛使用。公司持有将近3900项知识产权专利及专有许可证,堪称生命科学界最大规模的知识产 权资产。
11 Novozymes 诺维信
总部所在地:哥本哈根,丹麦
市值:$73亿
雇员数:5824
性质:公开(粉纸交易市场)
业务领域:酶制剂,微生物制剂
简介: 诺维信成立于1941年,是领导世界酶制剂和微生物领域产品的公司,世界市场份额超过45%,产品销售遍及全球130多个国家。诺维信总部设在哥本哈根,在30个国家建立了分支机构。该公司是丹麦在华最大投资企业之一,自1994年起累计在中国投资超过2亿
12 Illumina伊鲁米那
总部所在地:圣迭戈,加州,美国
股价(或估值):$49.1亿
雇员数:2,200
性质:公开(纳斯达克)
业务领域:测序技术
简 介:Illumina于1998年4月创立,2000年7月于Nasdaq上市,总部设在加利福尼亚的圣迭戈。Illumina的目标是用创新的技术以及 革命性的检测手段提供基因变异和功能研究,这些研究使得个人化医疗成为可能。作为一家全球性公司,Illumina 以崭新的技术 在创新性,灵活性,可升级性,以及一流的服务与支持等方面创新了新的业界标准。Illumina创新的芯片技术被称之为微珠芯片技术 (BeadArray),在这项技术的帮助下,Illumina 击败了众多竞争对手,成为人类基因组项目最主要的基因
13 Amylin Pharmaceuticals艾米林
总部所在地:圣迭戈,加州,美国
市值:$44.6亿
雇员数:1,300
业务性质:生物医药
简介:Amylin生产的药物主要针对代谢类疾病,包括糖尿病和肥胖症。Amylin正在试图将瘦素商业化用于减肥。
14 BioMarin Pharmaceutical
总部所在地:诺瓦托(Novato),加州,美国
市值:$42.9亿
雇员数:1,002
业务性质:生物医药
简介:BioMarin的技术是使用酶替代疗法治疗代谢类疾病,如粘多糖代谢病。
15 Medivation
总部所在地:旧金山,加州,美国
市值:$3b
雇员数:154
业务性质:生物医药
简介:Medivation制作研发,他们貌似有一些新技术可以快速筛选药物分子,详情未知。
16 Seattle Genetics
总部所在地:巴索,华盛顿州,美国
市值:$30亿
雇员数:483
业务性质:生物医药
简介:专门生产针对癌症的单克隆抗体药物。
17 Ariad Pharmaceuticals
总部所在地:剑桥,麻省,美国
市值:$29.5亿
雇员数:150
业务性质:生物医药
简介:癌症
18 Incyte因赛特
总部所在地:威明顿,美国
市值:$29亿
雇员数:368
业务性质:生物医药
简介:Incyte早年曾与Human Genome Sciences合作进行人类基因组测序工作,是人类基因组计划之外私人基因组测序方之一,专长在于基因信息分析。后转入药物研发领域,目前的研究重点在癌症和炎症上。
19 Human Genome Sciences人类基因科学
总部所在地:罗克维尔,马里兰,美国
市值:$26.3亿
雇员数:1,100
业务领域:生物医药
简 介:成立于1992年,曾参与人类基因组测序。2000年,美国政府宣布所有人类基因组数据不允许专利保护,且必须对所有研究者公开后,HGS将业务转移 到药物研发上,与Incyte类似,HGS 利用人类基因组序列信息开发蛋白质和抗体类药物。HGS最近很火,因为GSK(葛兰素史克)上个月提出26亿美元收购HGS,而HGS认为此价格严重低估 了公司价值,双方正在火拼中。
20 Cubist Pharmaceuticals科比斯特
总部所在地:莱克星敦,麻省,美国
市值:$25亿
雇员数:669
业务领域:生物医药
简介:Cubist的药物主要针对急症护理领域。

Y 染色体演化历程

4 月24日,《自然》发表的两篇论文给雄性的 Y 染色体演化和功能提供了新见解。众所周知, Y 染色体在演化历史中丢失了大量基因,不过丢失基因的过程在大约 2500 万年前停止了,留下了一组稳定的祖先基因。这两篇文章共同指出,由于剂量原因,这些基因被“精心”保留下来,因为它们的功能和其他基因以及其他基因的产物 具有相互作用。

由 于有着大量的重复序列, Y 染色体的重建并不容易,但是瑞士洛桑大学的 Henrik Kaessmann 和同事开发出一种新测序技术,帮助他们探索 15 种具有代表性的哺乳动物的 Y 染色体演化历程。分析结果显示,虽然有些 Y 染色体基因演化出新功能,但大多数 Y 染色体基因可能受剂量限制,保留了原来的功能。

在 另一项由美国麻省理工学院 Daniel Bellott 及其研究团队进行的对 8 种哺乳动物 Y 染色体的独立研究,同样展示了剂量限制是保留 Y 染色体上祖先基因的重要选择压力。该研究团队提出, Y 染色体除了参与形成睾丸和生成精子外,对于雄性的存活也是必要的。他们认为, Y 染色体基因在两性的健康与疾病的区别上有重要的作用。例如,他们推测特纳综合征(一种由于缺少了一条性染色体产生的染色体疾病)的表现,可能由X染色体和 Y 染色体上基因对的剂量决定。

基因疗法,失聪者的福音

研究人员发现一种治疗耳聋基因疗法。这种方法是可以将刺激人耳听觉感受器再生的基因插入到无害的病毒中,通过注射这种经过基因改造的病毒,失聪者将可以恢复听力。这是世界首个针对失聪的基因治疗方法。在短短两个月的时间里,重度失聪者就可以恢复听力。临床试验将于下月展开。
  这种治疗方法可使失聪者获得比现有其他技术手段更加自然的听觉——助听器只是将声音放大;人工耳蜗虽然能将声波转化为大脑可识别的电信号,但是它无法从声波中甄别出自然频率,这就导致使用者很难区别人声和音乐。
  堪萨斯大学医学中心的辛里奇·斯塔艾克(Hinrich Staecker)表示:“问题的关键是恢复人们的自然听力。我们希望的是修复人们的耳朵而不是用人工设备模拟它。”由于内耳中很多精密的结构位于人体最坚硬的骨骼(头骨)中,所以关于人耳的工作原理尚有很多未解之处。
  我们知道声波进入人耳后,会使鼓膜产生震动。这种震动会通过三块听小骨传递到位于内耳的耳蜗。耳蜗中的柯蒂氏器上分布着很多听觉感受器——成排的内毛细胞和外毛细胞。声波通过外耳放大后,使内毛细胞产生振动,导致毛细胞顶部附近的离子通道的打开,神经递质通过通道进入细胞。这一过程会引起耳蜗神经元产生电信号,信息就这样被传入了大脑。

  柯蒂氏器上的毛细胞。图片来源:NewScientist
  外伤、药物、噪音可能造成毛细胞死亡,这些毛细胞一旦死亡就无法再生。2003年时,科学家发现特定基因可以促使毛细胞周围的支持细胞转化为毛细胞。去年,斯塔艾克和他的同事们将其中一种名为Atoh1的基因插入到无害病毒中,再将这种经过基因改造的病毒注射到毛细胞几乎全部死亡的小鼠体内。两个月后,小鼠的听力提高了20分贝。
  现在,斯塔艾克将这一技术应用到了人身上。下个月,他们会征集45名听力严重受损的志愿者参与实验。这些志愿者大多是由于药物副作用导致失聪,他们耳内的毛细胞几乎全部死亡,但是支持细胞还在。这种治疗可能存在的副作用是耳部手术后常见的头晕和恶心。治疗用到的病毒并不会扩散到注射区域以外,而且也不会和患者自身的DNA发生重组。斯塔艾克预计这种方法将可以帮助1%到2%的失聪患者,在美国大概有700万人将得益于这种新的治疗方法。

  人耳听到声音的原理以及基因治疗的原理。图片来源:NewScientist
  信息来源:NewScientist,Deaf people get gene tweak to restore natural hearing

Cell重要发现:干细胞听命于其子细胞

有时候干细胞会打开开关分裂生成子细胞,有时候则会关闭开关维持在静息状态。直到现在科学家们仍未完全了解是什么引起了这些细胞在活化和静息状态之间切换。

 

来自洛克菲勒大学Elaine Fuchs哺乳动物细胞生物学和发育实验室的一项新研究将焦点放在了毛囊干细胞上,确定了是什么开启了它们。研究人员发现由这些干细胞生成的子细胞——过渡扩充细胞(Transit-AmplifyingCellTACs)发送了一种信号告知静息毛囊干细胞变得活化。

 

Fuchs实验室前博士后Ya-ChiehHsu说:“许多类型的哺乳动物干细胞都生成TACsTACs是干细胞和其最终产物:血液、皮肤和别处完全分化的细胞之间的一种中间体。在过去,人们将TACs视作是坐等被动生成组织的一群细胞。没有人会想到它们起着调控作用。”

 

HsuFuchs进一步确定了TACs发送出的信号。他们明确地找到了称作为Sonic Hedgehog的一种促细胞分裂蛋白,其在大脑、眼睛和四肢的胚胎发育中发挥作用。

 

由于有潜力生成一些具有特定功能的特化细胞,干细胞在医学应用领域具有重要的价值。干细胞生成这些分化细胞的能力对于机体的正常维持、生长及修复至关重要。许多的组织具有两种干细胞群:一种很少分裂,称作为静息干细胞;另一种更易于增殖,称作为始发态干细胞(primed stemcell)。无论它们的增殖频率如何,人类的大多数干细胞都不会直接生成分化的子细胞;它们会生成一种中间增殖细胞群即TACs

 

毛囊是生成毛发的一种微小器官,其形成狭窄毛囊管腔向下伸入到皮肤里。毛囊不断地在生长、破坏和静息状态之间循环。当进入到生长期时,始发态干细胞群总是首先分裂并生成TACs,这些TACs在毛囊中向下聚集。始发态干细胞增殖为下一轮的毛发生长创造了条件,确保了随时间损失的毛发能够被替换。增殖TACs则生成了毛干,以及皮肤下毛发周围的所有细胞,这些细胞构成了毛囊。

 

一开始,HsuFuchs怀疑TACsSonicHedgehog在毛发再生中起作用。

 

“我们注意到,始发态干细胞群早期激活,生成了TACs,而静息干细胞群只在TACs生成时活化。这种联系促使我们去寻找TACs生成的信号。我们随后证实了Sonic Hedgehog就是我们要寻找的信号,”Fuchs说。

 

在发表于58日《细胞》(Cell)杂志上的一些实验中,Hsu通过敲除成年小鼠毛囊中的负责基因使得TACs无法生成Sonic Hedgehog蛋白。由此,毛囊干细胞和它们TACs的增殖均受到了影响。他们进一步证实静息干细胞群增殖需要SonicHedgehog

 

令人惊讶的是,当Hsu阻断静息干细胞响应Sonic Hedgehog的能力时,毛发生长继续进行,但毛囊变短,每经历一轮毛发周期,静息和始发态干细胞群均数量减少,直至毛发完全无法再生。根据研究人员所说,这些特征与男性脱发中发生的事件极其地相似(延伸阅读:华人学者Nature子刊发表再生医学重要成果)。尽管这种机能紊乱的根源有可能是在SonicHedgehog的上游,这一研究提供了关于脱发现象的一些新见解,从长远来看对于开发出新的疗法具有重要的意义。

 

TACs是许多不同的干细胞谱系的一个阶段,研究人员断定尽管精确的机制有可能有所差异,在我们的血液和肠等其他组织中TACs有可能发挥了相似的作用。Fuchs说:“在大多数成人组织中,我们的干细胞必须能够快速响应损伤。通过利用TACs作为变阻器,可以严格地调控这一过程确保生产适当数量的新组织来修复损伤。因此,不可以再将TACs视作是一种干细胞谱系的被动中间体,而是协调组织再生的一个关键信号中心。”

 

Transit-Amplifying Cells Orchestrate Stem Cell Activityand Tissue Regeneration

 

Transit-amplifying cells (TACs) are an early intermediatein tissue regeneration. Here, using hair follicles (HFs) as a paradigm, we showthat emerging TACs constitute a signaling center that orchestrates tissuegrowth. Whereas primed stem cells (SCs) generate TACs, quiescent SCs onlyproliferate after TACs form and begin expressing Sonic Hedgehog (SHH). TACgeneration is independent of autocrine SHH, but the TAC pool wanes if theycan’t produce SHH. We trace this paradox to two direct actions of SHH:promoting quiescent-SC proliferation and regulating dermal factors that stokeTAC expansion. Ingrained within quiescent SCs’ special sensitivity to SHHsignaling is their high expression of GAS1. Without sufficient input fromquiescent SCs, replenishment of primed SCs for the next hair cycle iscompromised, delaying regeneration and eventually leading to regenerationfailure. Our findings unveil TACs as transient but indispensable integrators ofSC niche components and reveal an intriguing interdependency of primed andquiescent SC populations on tissue regeneration.

你会看孩子的验血报告吗?

带孩子看病一定要化验血常规吗,这是很多爸爸妈妈比较困惑的问题,如果孩子高烧,家长也许没有异议,如果孩子只是嗓子疼或者咳嗽,很多家长就很不理解。

其实,化验血常规很重要,这是判断孩子的疾病严重程度和变化的一个可靠依据。因为很多疾病的早期症状跟感冒差不多,根据血常规报告单就可以排除很多严重的疾病,还可以对症用药,防止滥用抗菌素。

血常规化验单对医生的诊断很重要,其实对孩子的家长来说也很重要。通过这张小小的化验单,家长可以了解孩子的身体状况,了解孩子病情的发展,从而有针对性地护理。但是很多家长都看不懂血常规化验单,门诊医生也没有时间给家长详细地解释。



第一,先来看化验单中的第一项CRP。CRP就是C反应蛋白,很多大医院都开展微量血CRP的检查。这是一个初筛的检查,可以判断孩子是不是细菌感染。白细胞也可以判断孩子是不是细菌感染,但CRP更敏感一些,它比白细胞出现的时间更早。同时CRP还是疾病全身反应的指标,如果数值高出正常值数倍,往往提示病人身体的多个脏器受到损伤。另外,CRP还和一些严重疾病有关系,比如传染性单核细胞增多症、川崎病、风湿热等。

第二,看白细胞(WBC)的数量,很多家长拿到化验单只知道看白细胞高不高。一般来说,如果白细胞的数量大于10000,就提示孩子有细菌感染,需要使用抗菌素。白细胞的数值越高,说明细菌的毒力越强或者细菌的数量越多。

但有时候白细胞特别高,不见得就一定是细菌感染,白细胞内还有淋巴细胞和中性粒细胞。如果孩子患有传染性单核细胞增多症,他体内的淋巴细胞就特别高,所以白细胞总数也特别高,可能达到20000,甚至30000,实际上这里面大部分是淋巴细胞,而不是中性粒细胞。

白细胞旧称白血球,是血液中的一类细胞。白细胞通常被称为免疫细胞,是人体和动物血液及组织中的无色细胞。有细胞核,能作变形运动。白细胞一般有活跃的移动能力,它们可以从血管内迁移到血管外,或从血管外的组织中迁移到血管内。因此,白细胞除了存在于血液和淋巴中外,也广泛存在于血管、淋巴管以外的组织中。血液中的白细胞有五种,从体积来看,从小到大依次为淋巴细胞、嗜碱性粒细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和单核细胞。

第三,看中性粒细胞的百分率,数值越高,说明疾病还在发展,有可能进一步加重。中性粒细胞主要是针对细菌的,当孩子的身体受到细菌感染的时候,中性粒细胞就会增加,来杀死细菌。如果中性粒细胞百分率降低,淋巴细胞百分率相应地就要升高,说明孩子可能是病毒感染。

第四,要看中性粒细胞的绝对值,如果它低于正常值,说明有病毒感染。中性粒细胞的绝对值越低,说明病毒感染的程度越严重。如果高于正常值,说明是细菌感染。有些孩子,他们体内的白细胞总数不太高,但是中性粒细胞绝对值很高,这预示着孩子的发热会越来越厉害。

第五,看血小板,血小板的数值越高,说明孩子感染的次数越多。这个孩子的血小板是正常的,很多反复感染的孩子,血小板数值都是400万、500万。

第六,看嗜酸细胞(EOS)绝对值和嗜碱性细胞(BASO)绝对值,它们是判断孩子是否过敏的指标之一。从表格中我们可以看到:这个孩子的嗜酸性细胞绝对值是,正常值是乣,高出正常值很多,说明孩子过敏很严重,说明这个孩子这次生病是在过敏基础上受到感染导致的。

第七,看淋巴细胞绝对值和淋巴细胞百分率。淋巴细胞是干什么的呢?淋巴细胞主要通过分泌抗体来对抗病毒的。如果这两个值高出正常值,就说明孩子可能是病毒感染。

第八,看单核细胞百分率和单核细胞绝对值。单核细胞是吞噬细胞,吞噬细胞对病毒和细菌都有作用,不管是病毒感染、细菌感染还是支原体感染,吞噬细胞就会第一个出现。单核细胞越高,说明孩子这次发热的程度越严重,持续的时间也越长。从表格中我们可以看到它的正常值不超过10,如果孩子的单核细胞百分率超过18,他一定会高烧3天以上才能好转,不管用什么药。

从这个化验单中,我们可以看出这个孩子过敏症状明显,同时又合并细菌感染,咳嗽可能比较严重。
温馨提示
  
化验血常规很重要,这是判断孩子的疾病严重程度和变化的一个可靠依据。拿到化验单,家长要重点看以下几项。

1.看白细胞的数量,如果白细胞的数量大于10000,就提示孩子有细菌感染,需要使用抗菌素治疗。
2.看中性粒细胞的百分率,数值越高,说明孩子是细菌感染而且说明疾病还在发展,有可能进一步加重。
3.看中性粒细胞的绝对值,如果它低于正常值,说明是病毒感染。
4.看淋巴细胞绝对值和淋巴细胞百分率。如果这两个值高出正常值,就说明孩子可能是病毒感染。
5.看嗜酸细胞绝对值和嗜碱性细胞绝对值,它们是判断孩子是否过敏的指标之一.


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